نيماتودا تعقد الجذور Meloidogyne - الانواع والسلالات والتوزيع

مقدمة

تاريخياً، تعود تسمية نيماتودا تعقد الجذور بهذا الاسم إلى العالم Cornu عام 1879 م. وفي عام 1887 م قام العالم Goeldi بوصف هذه النيماتودا في الجنس Meloidogyne، بينما قام العالم Chitwood في عام 1949 م بجمع كل أنواع نيماتودا تعقد الجذور المعروفة آنذاك تحت الجنس Meloidogyne. ومن الناحية التصنيفية، يتبع هذا الجنس إلى "تحت العائلة" Meloidogyninae subfamily ، والتي تتبع العائلة Meloidogynidae.

عالمياً، تعد نيماتودا تعقد الجذور واسعة الانتشار في المناطق الزراعية خاصة المناطق المروية. ولهذه النيماتودا مدى عوائلي واسع يشمل آلاف الأنواع النباتية من النباتات أحادية الفلقة وثنائية الفلقة والنباتات العشبية والخشبية (,Eisenback and Hirschmann 1991 ).

حتى الآن، تم وصف ما يزيد عن 80 نوعاً من نيماتودا تعقد الجذور (جدول 1)؛ منها أربعة أنواع فقط هي M. incognita و M. javanica و M. arenaria و M. hapla) تعد أنواعاً رئيسة منتشرة في معظم المناطق الزراعية في العالم 2002 Karrse). وفي الوطن العربي، حصرت أنواع وسلالات عديدة من نيماتودا تعقد الجذور في دراسات عربية متفرقة، وقد جمعت وأخصت نتائجها في الدراسة التي أجراها أبو غربية والعزة (2004).

جدول 1: قائمة بالأنواع التابعة للجنس Meloidogyne المعروفة حتى عام 2000

(عن: 2000 ,Siddiqi)

الموقع التصنيفي والصفات التشخيصية

Classification and diagnostic features

لقد تغير الموقع التصنيفي للجنس Meloidogyne خلال العقود الماضية، حيث كان في البداية ضمن عائلة Heteroderidae ضمن "تحت العائلة" Meloidogyninae، ثم وضع هذا الجنس ضمن عائلة مستقلة هي عائلة Meloidogynidae، لكونها تضم صفات تشخيصية متميزة عن بقية العائلات (1985 ,Hirschmann) حاليا، قسمت هذه العائلة إلى فئتين من "تحت العائلة" هما Nacobbinae التي تضم نيماتودا تعقد الجذور الكاذبة في الجنس Nacobbus، وتحت العائلة Meloidogyninae التي ينتمي لها الجنس Meloidogyne .

تتميز إناث هذا الجنس بشكلها الكمثري، وبعضها بيضاوي، يرافقه وجود نتوء بارز في المؤخرة يسمى النمط العجاني (شكل 1). يظهر النمط العجاني في مؤخرة الأنثى بأشكال متنوعة (مستدير، بيضاوي، كمثري، قوسي) وله ترتيبات متنوعة لخطوط الكيوتيكل ناعم، مستمر، متموج، متعرج، بالإضافة إلى وجود أو عدم وجود أجنحة على أحد أو كلا جانبي النمط. يبلغ طول الرمح في الأنثى 10-25 ميكروناً ، وللأنثى فتحة إخراج جانبية مقابلة ومقاربة للفتحة التناسلية. بينما الذكر دودي الشكل، وليس له جراب تناسلي، وله ذيل قصير، وطول شوكة السفاد فيه 19-44 ميكرون. أما يافعات (يرقات) الطور الثاني - بصورة عامة فهي قصيرة ونحيلة، حيث يبلغ معدل طولها 320 - 543 ميكروناً، ما عدا النوع M. spartinae الذي يصل طول اليافعة فيه لغاية 912 ميكروناً، والهيكل الرأسي لليافعة رفيع، والرمح ذو عقد صغيرة، وطول الرمح يبلغ  9 - 23 ميكروناً، والعضو الحسي hemizonid موجود داخل فتحة الإخراج (1985 ,Hirschman).

شكل 1. النمط العجاني لنيماتودا تعقد الجذور المغربية Meloidogyne morocciensis (Rammah and Hirschmann, 1990 :)

يتميز كل طور من أطوار دورة حياة الجنس Meloidogyne بعدد من الصفات الظاهرية والقياسات الشكلية المساعدة للتشخيص. ففي الإناث، تعد طريقة النمط العجاني لمؤخرة جسم الأنثى من الصفات المميزة في تشخيص الأنواع، بالإضافة إلى شكل وطول الرمح والفتحات الفازميدية. وفي الذكور، تتميز منطقة الرأس بصفات شكلية متعددة، تشمل حجم وارتفاع وشكل قمة الرأس، وعدد الحلقات وعرض منطقة الرأس، كذلك شكل وطول الرمح. أما بالنسبة للطور اليافع الثاني، فنجد طول وشكل الذيل من الصفات المميزة والمهمة.

أنواع نيماتودا تعقد الجذور Meloidogyne spp

1- الأنواع الاربعة الرئيسة

عالميا، يوجد أربعة أنواع رئيسة من نيماتودا تعقد الجذور، هي الأكثر شيوعاً وانتشاراً في المناطق الزراعية في العالم (2002 Karrse)، وهي كما يلي:

1- النوع M. incognita

يسمى هذا النوع بنيماتودا تعقد جذور القطن (cotton root-knot nematode)، ويسمى أيضاً بنيماتودا تعقد الجذور الجنوبية (Southern root-knot nematode) بسبب انتشاره في المناطق الزراعية الجنوبية من أمريكا الشمالية. يتصف هذا النوع بعدة خصائص ظاهرية، أهمها شكل النمط العجاني للإناث ذو الخصائص الآتية: قوس ظهري مربعي عال، وغياب خطوط الحقلين الجانبين ووجود الفواصل والتجاعيد بدلاً منها، وخطوط الكيوتيكل ناعمة إلى خشنة أو متعرجة أحياناً ، ونهاية الذيل تتميز بأنها غالباً برميلية الشكل (Hirschman 1985). وهذا النوع واسع الانتشار عالمياً، حيث يصيب مدى واسعاً من العوائل النباتية التي يزيد عددها عن 700 عائل نباتي، بما فيها من محاصيل زراعية وأشجار مثمرة ونباتات زينة. وحسب اختبار كارولينا الشمالية للعوائل التفريقية North Carolina differential host test (Hartman and Sasser, 1985))، يوجد لهذا النوع أربع سلالات فسيولوجية هي سلالة 1 و 2 و 3 و 4 (جدول 2)، فالسلالة (1) لا تتكاثر على صنف القطن (16 Deltapine) ولا على صنف التبغ (95 NC)، بينما تتكاثر السلالة (2) على الدخان فقط، وتتكاثر السلالة (3) على القطن فقط، وتتكاثر السلالة (4) على كل من القطن والتبغ (1982 .Taylor et al). يسود النوع M. incognita في المناطق الباردة والاستوائية وشبه الاستوائية (1991 Nickle,) التي قد يصل فيها متوسط درجات الحرارة إلى 36 م أو أقل في الأشهر الدافئة، والتي قد يزيد معدل هطول الأمطار السنوي إلى 500 ملم (1982 .Taylor et al). وفي البلدان العربية، يوجد النوع M. incognita في مصر والعراق والأردن ولبنان وليبيا والجزائر والمغرب وعُمان والسعودية والسودان وسورية واليمن.

جدول 2: اختبار كارولينا الشمالية للعوائل التفريقية الذي يستخدم في التفريق بين الأنواع الأربعة العالمية الرئيسة من Meloidogyne ( عن : 1985 Hartman and Sasser)

2- النوع M. javanica

يسمى النوع M .javanica بنيماتودا تعقد الجذور الجاوية (Javanese root knot nematode)، لأن وجوده اكتشف في البداية في جزيرة جاوا الاندونيسية. وهذا النوع واسع الانتشار عالمياً، ويصيب مدى واسعاً من العوائل النباتية التي يزيد عددها عن 700 عائل نباتي، بما فيها من محاصيل زراعية وأشجار مثمرة ونباتات زينة. يتصف هذا النوع بعدة خصائص ظاهرية، أهمها النمط العجاني للإناث، حيث يظهر ذو قوس ظهري دائري منخفض، ووجود خطوط الحقلين الجانبين ،الواضحة، وخطوط الكيوتيكل خشنة مستقيمة إلى متموجة أحياناً ، ونهاية الذيل غالباً برميلية الشكل (1985 Eisenback). وحسب اختبار کارولينا الشمالية للعوائل التفريقية (جدول 2)، لا يوجد لهذا النوع أي سلالات، لكن حديثاً تم تسجيل سلالتين (1 و 2) حسب درجة تكاثرها على الفلفل في بعض المناطق ( Khanet 2003 ,.al يسود النوع M. javanica في المناطق الدافئة في العالم، خاصة في وسط أفريقيا. وفي البلدان العربية، وقد سجل هذا النوع في مصر والعراق والأردن ولبنان وليبيا والمغرب والسعودية والسودان وسورية والإمارات العربية .

3- النوع M. arenaria

يسمى النوع M. arenaria بنيماتودا تعقد جذور الفول السوداني ( peanut root-knot nematode)، حيث يسبب خسائر اقتصادية كبيرة في مناطق زراعة الفول السوداني في العالم. يتصف هذا النوع بعدة خصائص ظاهرية، أهمها شكل النمط العجاني للإناث، حيث يظهر ذو قوس ظهري دائري منخفض منبعج من الحقلين الجانبين كالجناحين وغياب خطوط الحقلين الجانبين ووجود خطوط معقوفة غير منتظمة قصيرة بدلاً منها، خطوط الكيوتيكل خشنة ممهدة إلى متموجة أحياناً، ونهاية الذيل عادة غير برميلية الشكل (1985 ,Eisenback) وحسب اختبار كارولينا الشمالية للعوائل التفريقية (جدول 2)، توجد لهذا النوع سلالتان فسيولوجية هي سلالة (1) و (2). فالسلالة رقم (1) تتكاثر على صنف الفول السوداني (Florunner)، بينما لا تتكاثر السلالة رقم (2) على الفول السوداني. يُعد هذا النوع واسع الانتشار عالمياً، لكن بدرجة أقل من النوعين السابق ذكرهما (M. javanica M. incognita) ، حيث يوجد في المناطق الزراعية الدافئة في العالم. أما في البلدان العربية، فقد سجل هذا النوع M. arenaria في كل من مصر والعراق والأردن وليبيا والجزائر والسودان وسورية واليمن.

4- النوع M. hapla

يسمى النوع M. hapla بنيماتودا تعقد الجذور الشمالية ( Northern root-knot Nematode)، بسبب انتشاره في المناطق الزراعية الشمالية من أمريكا الشمالية. يتصف هذا النوع بعدة خصائص ظاهرية، أهمها خصائص النمط العجاني، حيث يظهر ذو قوس ظهري دائري منخفض، وغياب خطوط الحقلين الجانبين، وخطوط الكيوتيكل ناعمة ممهدة إلى متموجة قليلاً، ونهاية الذيل عادة غير برميلية الشكل تتميز بوجود النقط تحت الكيوتيكل (1985 ,Eisenback). وحسب اختبار كارولينا الشمالية للعوائل التفريقية (جدول 2)، لا يوجد لهذا النوع أي سلالات فسيولوجية، لكن توجد سلالتان وراثيتان cytogenetical races :هما سلالة A وسلالة B حسب فحص وراثة الخلية 1985 ,Triantaphyllou). ينتشر هذا النوع في المناطق الزراعية الباردة نوعاً، وفي بعض المناطق الزراعية الدافئة المرتفعة في العالم، التي قد يصل فيها متوسط درجات الحرارة إلى ما دون - 15 م في الأشهر الباردة، وإلى أقل من 27°م في الأشهر الدافئة (1982 ,.Taylor et al)، وقد سجل النوع M. hapla في مصر والعراق وليبيا .

2- الأنواع الأخرى من نيماتودا تعقد الجذور

تعد غالبية هذه الأنواع معزولة جغرافياً، وذات أهمية اقتصادية ضئيلة بالمقارنة مع الأنواع الرئيسة عالمياً. ومن الممكن، تعريف عدة أنواع منها بسهولة بالاعتماد على مداها العوائلي الضيق أو على بعض الخصائص الشكلية المميزة عربياً، بالإضافة إلى الأنواع الثلاثة الأكثر انتشاراً في معظم الدول العربية وهي M. incognita و M. javanica و M. artiellia و M. arenaria ، تم حصر عدة أنواع ثانوية من نيماتودا تعقد الجذور هي: M. hapla و M. morocciensis و M. naasi , M. thamesi في بعض البلدان العربية. وهذا النوع M. artiellia من الأنواع التي تسود منطقة البحر المتوسط، حيث يوجد في بعض البلدان العربية مثل الجزائر وفلسطين والمغرب وسوريا وتونس، خاصة على الحمص وبعض المحاصيل النجيلية كالقمح والشعير، بينما اكتشف النوع الجديد M. morocciensis في المغرب متطفلاً على أصل جذري من الدراق، حيث قام الباحثان Rammah و Hirschmann بتسميته ووصفه (1990 ,Rammah and Hirschmann). يظهر الشكل (1) النمط العجاني لهذه النيماتودا.

دراسات حصر نيماتودا تعقد الجذور في البلدان العربية

في الوطن العربي، تم اكتشاف وتسجيل عدة أنواع من نيماتودا تعقد الجذور - رئيسة وثانوية - على عدة عوائل نباتية اقتصادية، وذلك في عمليات الحصر الميدانية التي أجرها الباحثون العرب خلال السنوات السابقة في المناطق الزراعية المختلفة المنتشرة في البلدان العربية . وهنا نورد ملخصاً لمعظم دراسات الحصر العربية مرتبة بحسب الترتيب الهجائي لاسم البلد العربي :

1- الأردن

تم إجراء حصر ميداني خلال الفترة 2002 / 2003 م، تضمن جمع عشائر النيماتودا من محاصيل خضر وأشجار فاكهة متعددة في مقاطعات ومناطق مروية متعددة ومتنوعة مناخياً، حيث وجدت ثلاثة أنواع من نيماتودا تعقد الجذور هي: النوع M. javanica الذي تبين أنه الأوسع انتشاراً، والنوع M. incognita السلالة (1) و (2)، والنوع M. arenaria السلالة (2) (2005 ,.Abu-Gharbieh et al). وقد سجل النوع M. arenaria لأول مرة في الأردن (2005 ,.Karaj et al)، بينما سجل النوعان الآخران في دراسات سابقة (1979 ,Hashim, 1983 Abu-Gharbieh, 1982 Hashim (Yousef and Jacob, 1994: Atieh, 1986 ).

2- الإمارات العربية المتحدة

ينتشر النوعان M. incognita و M. javanica على البندورة (الطماطم) والبطيخ والنخيل (1998 ,Al-Asam).

3- الجزائر

في دراسة تمت لحصر أنواع نيماتودا تعقد الجذور في البيوت البلاستيكية، تم تسجيل أربعة أنواع هي: M. javanica السائد في المناطق الجنوبية، وM. incognita السائد في المناطق الساحلية، والنوعان M. arenaria و M. hapla في مناطق محدودة (1998 ,.Sellami et al ؛ 1999 ,.Sellami et al).

4- السعودية

ينتشر النوعان M. javanica و M. incognita السلالة (2) على عدة نباتات اقتصادية. حيث وجد هذان النوعان متطفلين على معظم المحاصيل الخضرية والحقلية مثل البطاطس Al-Hazmi et al 1993, Al-Yahya, 1998: Eissa et al., 1979)) ، والقمح والذرة البيضاء والبرسيم الحجازي، والأشجار المثمرة، خاصة العنب والنخيل والحمضيات (1972 ,Abdu؛ 1983 ,.Al-Hazmi, 1984 Al-Hazmi, et al) وبعض النباتات البرية (1999 .Al-Yahya et al).

5- السودان

تعد نيماتودا تعقد الجذور من أهم الآفات على الخضراوات والتبغ. حيث توجد الأنواع M. javanica و M. arenaria, M. incognita ، خاصة في الأراضي الزراعية ذات الترب الخفيفة على طول ضفتي نهر النيل (1979 ,.Decker et al). ويوجد النوع M.javanica في الجزء الشمالي من السودان مسبباً ضرراً كبيراً على البندورة والتبغ، بينما يوجد النوع M. incognita في الجزء الجنوبي على البندورة والباذنجان ( 1986 Yassin 1987 and، وفي الجزء الأوسط (ولاية كنانة) على محصول قصب السكر ( Saadabi 1988 ).

6- سورية

يوجد النوعان M. javanica و M. incognita على محصولي البنجر السكري والقطن، والنوع M. artiellia على محاصيل الحمص والبازيلاء والبيقيا ) .reco et al 1984؛ 1987 ,Al-Ahmad, 1987 : Oteifa)، ويوجد النوع M. incognita أيضاً على الخيار والبندورة والتوت الأحمر، بينما يوجد النوعان M. arenaria, M. javanica على البندورة (1984 ,Lamberti).

7- لبنان

يوجد النوعان M. incognita و M.javanica في مناطق زراعة الموز، وفي معظم المناطق الزراعية الأخرى. بينما يوجد النوع M. arenaria في بعض المناطق الزراعية (1970 ,Saad and Tanveer ؛ 1998 ,Waele and Romulo).

8- ليبيا

تُعد نيماتودا تعقد الجذور النيماتودا الأهم اقتصادياً، حيث توجد في معظم المناطق الزراعية (1980 ,Siddiqui, Dabaj and Khan, 1981:Khan and Dabaj 1982 الدنقلي وآخرون، 1986؛ 1987 ,Dabaj and Jenser الفرجاني، 1988؛ 1989 ,Fourgani and Edongali) ، حيث يوجد النوعان M. javanica M. .incognita على معظم المحاصيل الاقتصادية ( 1980 ,.Faraj et al ؛ 1982 ,Edongali and Dabaj 1982 ,Dabaj and Khan)، وعلى بعض أشجار الفاكهة كالزيتون والنخيل والحمضيات وبعض الأشجار متساقطة الأوراق والعنب 1985 El-Maleh الدنقلي والفرجاني ، Edongali and El-Majberi, Siddiqui and Khan, 1986a and 1986b :1986 1988 1989 ,Edongali ؛ 1995 ,El-Mal and Edongali) وعلى بعض نباتات الزينة (الفرجاني ،وآخرون، 1994 1993 ,Saadabi)، ووجد النوع M. arenaria على الذرة والفول والنوع M.hapla على الفول السوداني والباذنجان و M. naasi على الشعير (1987 ,Dabaj and Jenser). وتوجد الأنواع M. graminicolas M.artiellia و .M graminis على الفلفل وبعض الأعشاب البرية 1989 ,Fourgani and Edongali).

9- العراق

توجد خمسة أنواع من نيماتودا تعقد الجذور، وهي M. arenaria (السلالة 1)، و M. incognita (السلالات 1 و 2 و 4) ، و M. javanica و M. thamesi, M. hapla  ؛,Katcho 1972  1985 ,.Al-Sabie and Ami, 1990 Stephan et al)، حيث تم تعريفها وتسجيلها على 120 نوعاً من العوائل النباتية 1987 ,Stephan, Stephan 1988. وفي دراسة أخرى، تم اكتشاف وجود السلالة رقم (2) من النوع M.arenaria على البطيخ في شمال العراق (السبع وعمّي، 1990). وفي دراسة أجريت حديثاً لحصر أنواع نيماتودا تعقد الجذور على البندورة ، تم تسجيل وجود السلالة رقم (4) من النوع M. incognita لأول مرة في العراق، والتقرير بأن النوع M. javanica هو الأكثر انتشاراً على البندورة في العراق (عمي والسبع، 2002).

10- عمان

تم تسجيل وجود النوع M.incognita على الموز والبرسيم الحجازي في منطقة البتينه (1996 Mani and Al-Hinai, 1996a and).

11- مصر

تعد نيماتودا تعقد الجذور آفة رئيسة، تتسبب بخسائر اقتصادية كبيرة في إنتاج معظم المحاصيل الخضرية خاصة البندورة (1982 ,EL-Sherif and EL Ibrahim 1983 ,Sherif؛ 1986 ,.Mostafa et al., 1997 Ibrahim et al)، وفي الأشجار المثمرة خاصة الدراق والعنب والنخيل، وفي المحاصيل الحقلية خاصة القطن ودوار الشمس والبنجر السكري (1976 ,.El-wakil and El-Sherif, Shohla, 1980 Embabi et al 1983 1990 ,Sharma)، ونباتات الزينة 1986 ,Ismail and Ibrahim and Kandeel 1993 ,Ismail and Amin, 1997 Eissa). وتنتشر في مصر الأنواع الرئيسة من نيماتودا تعقد الجذور، حيث تنتشر الأنواع M. javanica و M. incognita M.arenaria على معظم المحاصيل الحقلية والخضر وبعض أشجار الفاكهة ( Ibrahim 2002). ويوجد النوعان M. incognita و M. javanica على جذور النخيل في محافظتي الإسكندرية والبحيرة، بينما يوجد النوع M. arenaria على جذور النخيل في محافظة مطروح (2000 ,.Ibrahim et al) ، ويوجد النوع M. apla. على الفراولة ( Ibrahim 2002 ).

12- المغرب

يوجد النوع M .javanica على محاصيل الخيار والبندورة والباذنجان (1997 ,.Eddaoudi et al)، وبعض المحاصيل البقولية (1987 ,Ammati)، والموز (1990 ,Rammah ؛ 1997 ,.Eddaoudi et al) . كما وجد النوع M.incognita على محصولي الفلفل والبندورة 1997 Eddaoudi ser ، والنوع M. morocciensis على الفول السوداني (1990 ,Rammah and Hirschmann). في حين وجد النوع M. ariellia على الحمص والفول في كلاً من المغرب وتونس (1994 ,.Di Vito et al).

13- اليمن

وجد النوع M.incognita على بعض المحاصيل الاقتصادية وأشجار التين (Abu-Gharbieh, 1983 : Sikora, 1978) والموز  (Waele and Romulo, 1998) بينما وجد النوع الأخر M. renaria على التين (1983 ,Abu-Gharbieh).

الطرق المتبعة في تعريف نيماتودا تعقد الجذور

إن التعريف الصحيح لعشائر نيماتودا تعقد الجذور إلى أنواع وسلالات يعد القاعدة الأساسية التي يعول عليها في الحصول على مكافحة ناجعة للنيماتودا، خاصة عند استخدام الدورة الزراعية والأصناف المقاومة في مكافحة النيماتودا. وأيضاً، إن تحديد النوع والسلالة مهم في إجراء دراسات بحثية متخصصة ودقيقة (1985,Eisenback). من الممكن تعريف عدة أنواع من نيماتودا تعقد الجذور بسهولة بالاعتماد على مداها العوائلي الضيق أو على بعض الخصائص الشكلية المميزة.

في البداية بعد استخلاص النيماتودا من جذور النبات وتربته، يتم تعريف أنواع نيماتودا تعقد الجذور بالاعتماد على الصفات الشكلية morphological characters للأطوار الحياتية المختلفة من الإناث والذكور ويافعات الطور الثاني. حيث تستخدم كلاً من الصفات النوعية والقياسية، إلا أن الصفات النوعية تعد أكثر جدوى وفائدة من القياسات الشكلية في إعطاء التعريف الدقيق (1983 Karajeh, 2004 ;Jepson,). يعد شكل النمط الجاني perineal pattern ، الموجود في الجزء الخلفي للإناث، أهم صفة شكلية نوعية مميزة بين معظم أنواع الجنس Meloidogyne ، والنمط العجاني عبارة عن منطقة تحوي خطوط منتظمة من الكيوتيكل وانثناءات إضافية في طبقة الكيوتيكل الخارجية للإناث. ويتغير شكل النمط العجاني مع نضج الإناث، لذا يجب أن تقتصر الفحوصات التصنيفية على الإناث اللائي هن في مرحلة وضع البيض فقط. وعادة ما يقتصر استخدام صفة شكل النمط العجاني في تمييز الأنواع فقط، حيث لا يمكن التمييز بين السلالات المختلفة من نفس النوع بسبب غياب الفروق الشكلية الواضحة بينها.

هنالك صعوبة في تعريف الأنواع الأربعة الرئيسة من نيماتودا تعقد الجذور، بسبب وجود بعض الفروق في الصفات الشكلية بين العشائر المختلفة ضمن نفس النوع، فبعضها يمثل النوع في صفاته وبعضها يصعب تمييزه بسبب وجود أفراد متنوعة في الشكل ولا تمثل النوع في داخل العشيرة الواحدة. ومما يزيد في صعوبة التعريف أيضاً، حدوث خلط عشائري بين نوعين أو أكثر من نيماتودا تعقد الجذور في الحقل نفسه، وخاصة عندما تتشابه هذه الأنواع في بعض الصفات التشخيصية، وغالباً ما يكون في شكل النمط العجاني. لذا فإن إجراء المقارنة بين الصور الملتقطة بالمجهر الضوئي والإلكتروني، يظهر وجود فروق شكلية واضحة في رمح الإناث والذكور في الأنواع الأربعة الرئيسة، حيث يمكن ملاحظة هذه الفروق في شكل الرمح بسهولة بالمجهر الإلكتروني، وبصورة أقل وضوحاً بالمجهر الضوئي (1991 ,Eisenback and Triantaphyllou).

يعتبر موقع الفتحة الإخراجية للإناث من الصفات الشكلية المفيدة في تمييز بعض أنواع النيماتودا، إلا أن هذه الصفة قد تتباين داخل العشائر أو في النوع الواحد. ويعد شكل وطول ذيل يافعات الطور الثاني من أهم الصفات الشكلية، لأنها تتباين بين الأنواع المختلفة، بينما لا يوجد سوى تباينات ضئيلة داخل النوع الواحد (1985 ,Hirschman) وقد أمكن تعريف 33 نوعاً في 12 مجموعة بالاعتماد على التشابه في شكل وطول ذيل اليافعة (1983 Jepson,). على كل حال، فإن تعريف الأنواع بالاعتماد على الصفات الشكلية يحتاج إلى مهارة كبيرة، وإلى فحص عدد كبير من الأفراد في داخل العشيرة الواحدة. وتزداد دقة التشخيص إذا تم تدعيم نتائج التعريف بالصفات الشكلية مع نتائج الطرق المستخدمة الأخرى.

ومن الممكن أيضاً، التمييز بين أنواع هذه النيماتودا باستخدام اختبار نورث كارولين للعوائل التفريقية ، الذي يستخدم عادة في تعريف الأنواع الأربعة العالمية الرئيسة وسلالاتها (جدول 2) وقد يساعد في تمييز العشائر المختلطة من هذه أنواع، ويعد الطريقة الوحيدة التي يمكن من خلالها تمييز السلالات الفسيولوجية الأربع الخاصة بالنوع M. incognita. لكن يحتاج هذا الفحص إلى وقت طويل (60 يوماً) من أجل معرفة مدى استجابة النبات للنيماتودا، وقد يعطي نتائج مضللة في حالة العشيرة التي تحتوي أكثر من نوع أو سلالة.

وتعد طريقة وراثة الخلية من الطرق التي استخدمت في تمييز بعض الأنواع والسلالات الوراثية (1985 ,Triantaphyllou). حيث يمكن استخدام أصباغ معينة مثل Orcein و Giemsa في صبغ المورثات Chromosomes الموجودة في أنوية الخلايا التناسلية في الإناث التي في مرحلة وضع البيض، ثم تحديد عدد المورثات لكل نوع أو سلالة ومقارنته مع الأنواع الأخرى باستخدام دليل معلومات وراثة الخلية (جدول 3). من خلال هذه الطريقة، تم تعريف عدة سلالات وراثية من النوع M. arenaria ومن النوع M. hapla (Triantaphyllou, 1990).

وتعد طريقة فحص أنماط البروتين الشكلية لإنزيمات Esterase و Malate Dehydrogenase خاصة من أهم الطرق الجزيئية التي تستخدم في تعريف أنواع النيماتودا. حيث يمكن عزل البروتين من الإناث البالغة المفردة، وعمل نمط بروتيني لكل منها باستخدام الفصل الكهربائي على Polyacrylamide gel ، ومقارنتها مع أنماط البروتين الخاصة بالأنزيمين السابق ذكرهما . تعد هذه الطريقة حساسة، لذا يمكن الاعتماد عليها بشكل كبير في تمييز معظم أنواع النيماتودا، خاصة العشائر الحقلية غير المعروفة (1990 ,Esbenshade and Triantaphyllou) حديثاً، استخدمت أنماط البروتين كالصفات الشكلية للايسوزایمات Isozyme phenotypes لبعض الأنزيمات مثل Esterase و Malic dehydrogenase في تمييز النوع M. haplomaria الذي يشترك في صفاته الشكلية مع النوعين M. hapla و M. arenaria (Eisenback et al., 2003).

أما البصمات الوراثية لـ DNA فهي من أدق الطرق الجزيئية التشخيصية وأسرعها ، حيث تستطيع أن تميز خلائط أنواع النيماتودا وتعطي النتائج بسرعة خلال أيام قليلة. تتضمن هذه الطريقة عزل وتنقية الـ DNA من أفراد النيماتودا (سواء كانت بيض أو يافعات الطور الثاني، مفردة أو مجتمعة، إناث مفردة أو مجتمعة)، ثم تضخيم الـ DNA من خلال تفاعل البلمرة المتسلسل ( Polymerase Chain Reaction, PCR) باستخدام بادئات primers متخصصة (طولها 18-23 قاعدة) مكملة لتسلسلات معينة موجودة على الـ DNA في مناطق ribosomal DNA أو mitochondrial DNA أو في المناطق المضخمة ذات التسلسل المعروفSequence Characterized Amplified Regions (SCAR) ، أو باستخدام بادئات عشوائية (طولها بحدود 10 قاعدة) من أجل تضخيم مناطق عشوائية في الـ DNA بما يسمى بالـ DNA المضخم عشوائياً متعدد الأشكال (Random Amplified Polymorphic DNA, RAPD). ثم يلي ذلك، عمل فصل كهربائي لحزم الـ DNA المضخمة ومشاهدتها تحت الأشعة فوق البنفسجية، ثم مقارنة حجم الحزم الناتجة مع مثيلتها التي تمثل كل نوع (شكل 2) . وقد تم استخدام هذه التنقية في تمييز العشائر المحلية من أنواع نيماتودا تعقد الجذور في بعض الدول العربية مثل الأردن (2005 ,.Karajeh et al) ومصر (2003 ,.Haroon et al).

جدول 3: معلومات وراثة الخلية التي تستعمل كدليل مرجعي لتحديد عدد الصبغيات ونمط التكاثر في نيماتودا تعقد الجذور. (عن: Triantaphyllou, 1985).

شكل 2. نواتج تضخيم الـ DNA ذات الأحجام 670 و 420 و 1200 زوج قاعدة الخاصة بتمييز عشائر الأنواع Meloidogyne javanica و M. incognita و M. arenaria على التوالي، وذلك باستخدام أزواج البادئات المتخصص بالنوع في تفاعل البلمرة المتسلسل في المناطق المضخمة ذات التسلسل المعروف SCAR-PCR ( عن 2005 ,.Karajeh et al).

عموماً ، يبقى الجمع بين عدة طرق تشخيصية ضرورياً من أجل إعطاء التعريف الصحيح والدقيق لكل نوع. فيمكن استخدام صفة النمط العجاني في تعريف النوع مع تأكيد التعريف باستخدام نمط البروتين أو البصمة الوراثية لـ DNA الخاصة بذلك النوع، بينما يمكن تمييز السلالات الفسيولوجية لبعض الأنواع باستخدام اختبار العوائل التفريقية والسلالات الوراثية لبعض الأنواع باستخدام فحوصات وراثة الخلية. ولا بد من الإشارة إلى أن هذا المجال يشهد تسارعاً مستمراً في تطوير تقنيات البصمات الوراثية وفي اكتشاف طرق تشخيصية حديثة. إن معرفة توزيع أنواع وسلالات نيماتودا تعقد الجذور في البلدان العربية، قد تستدعي إيجاد أو تفعيل مراكز الحجر الزراعي في الدول العربية من أجل منع دخول وانتشار الأنواع والسلالات من منطقة لأخرى ومن بلد لآخر.

الخلاصة

تعد نيماتودا تعقد الجذور من أهم أنواع نيماتودا النبات في العالم. تنتمي هذه النيماتودا إلى الجنس Meloidogyne في العائلة Meloidogynidae. حيث تضم كبيراً من الأنواع يزيد عن 80 نوعاً، منها أربعة أنواع شائعة عالمياً (M. incognita و M.hapla ,M. arenarias ,M.javanica ) ، وذات مدى تفضيل عائلي واسع من النباتات الاقتصادية. في الوطن العربي ولا يكاد يخلو بلد عربي من وجود نوع أو أكثر من نيماتودا تعقد الجذور. ويعد الجمع بين الطرق التشخيصية ضرورياً من أجل اعطاء التعريف الدقيق والصورة الواضحة لأنواع وسلالات نيماتودا تعقد الجذور، مما يساهم في الحصول على مكافحة ناجعة لها.